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根据GenBank中已发表的流产布鲁菌种特异的omp25基因序列及牛分枝杆菌特异保守的16S rRNA加工蛋白rimM基因序列设计了2对特异性引物,通过对PCR条件的优化,建立了快速鉴别检测牛布鲁菌Brucella abortus和牛分枝杆菌Mycobacterium bovis的双重PCR方法.对建立的方法进行特异性和敏感性试验,结果显示,在牛布鲁菌和牛分枝杆菌中分别扩增出448、269 bp的特异性目的条带,作为对照的大肠杆菌Escherichia coli、沙门菌Salmonella typhimurium、八叠球菌Sarcina lutea、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、巴氏杆菌Pasteurella multocida、军团菌Legionella pneumophila、枯草杆菌Bacillus subtilis及溶血性链球菌Streptococcus pneumonia均未扩增出任何条带.牛布鲁菌和牛分枝杆菌的DNA 最低检出量均为10 pg;牛奶样品中人工污染的牛布鲁菌和牛分枝杆菌的检测敏感性分别为7.9×103 CFU/mL、3 ng/mL. 相似文献
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根据美洲型猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRR_SV)基因组序列设计2对引物,对疑似PRR_SV感染猪的病料进行RT-PCR检测,核酸检测阳性病料进行PRR_SV分离,获得了1株美洲型PRR_SV,命名为GD08-2.对PRR_SV GD08-2株、GD-XH株、GD08-1株的ORF5基因和部分Nsp2基因进行序列测定与分析.结果表明,GD08-2株的ORF5基因与PRR_SV疫苗株pMLV、经典株VR-2332和GD-XH株的相似性较高,而与GD08-1株的相似性较低.GD08-2株的Nsp2基因推导的氨基酸序列出现12个氨基酸的不连续缺失,分别位于66～74位和192～194位,由此推测,GD08-2株可能为PRR_SV的突变株.GD08-1株的ORF5基因与国内分离的高致病性PRR_SV相似性较高,其Nsp2基因推导的氨基酸序列存在30个氨基酸的缺失,与国内高致病性PRR_SV分离株JXA1的缺失位置完全一致,由此推测,GD08-1株属于高致病性PRR_SV;GD-XH株的ORF5基因与疫苗株pMLV的相似性较高,其Nsp2基因存在个别核苷酸的点缺失.遗传进化分析表明,GD08-1株与国内分离的高致病性PRR_SV的遗传进化关系较近,属同一分支;GD-XH株和GD08-2株与PRR_SV经典株VR-2332、疫苗株pMLV的遗传关系较近,属另一分支. 相似文献
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