烟草丛顶病毒ORF3的克隆及原核表达

利用RT-PCR方法,自烟草丛顶病毒(Tobacco bush top virus,TBTV)龙陵分离物(TBTV-YLLi)的RNA中扩增出ORF3目的片段,并克隆到pMD18-T载体上进行序列分析.结果表明,TBTV-YLLi的ORF3全长714 bp,与TBTV其他分离物的核苷酸相似性和氨基酸相似性分别为98.3%～98.6%和95.4%～95.8%;与同属的花生丛簇病毒(Groundnut rosette virus,GRV)、豌豆耳突花叶病毒2号(Pea enation mosaic virus-2,PEMV-2)和胡萝卜拟斑驳病毒(Carrot mottle mimic virus,CMoMV)的核苷酸相似性分别为65.1%、61.6%和49.7%,氨基酸相似性分别为36.4%、34.6%和16.5%.将ORF3克隆到原核表达载体pET28a(+)上,获得的重组子pET28-ORF3转化大肠杆菌BL21-plysS,使用终浓度为1.0 mmol/L 的IPTG在37 ℃诱导培养4 h时,该融合蛋白表达量最高.融合蛋白经Ni~(2+)亲和柱层析纯化后,SDS-PAGE 电泳表明,融合蛋白相对分子质量约为35 000,与预计的相对分子质量大小相一致.     

表达鸡传染性支气管病毒S1蛋白的重组假型杆状病毒的构建

根据鸡传染性支气管炎病毒M41株的基因序列(GenBank:AY851295.1),设计特异性引物,利用 RT-PCR方法扩增其 S1基因,并将扩增产物克隆到杆状病毒转移质粒pFast-VSV-G-CMV中,获得重组质粒pFast-VSV-G-CMV-S1,进一步将该重组质粒转化到DH10Bac感受态细胞中,得到重组穿梭载体Bacmid-CMV-S1,再利用脂质体转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒Ac-V-S1.间接免疫荧光试验表明,该重组杆状病毒可以转导哺乳动物细胞并表达S1蛋白.     

猪圆环病毒2型广东株全基因组的克隆与序列分析

根据GenBank已发表的猪圆环病毒2 型(PCV2) 全基因组序列,设计2 对特异性引物,对广东省不同地区规模化猪场采集的疑似断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS) 组织病料进行了PCV2 全基因组克隆和序列分析.结果表明,PCV2 核苷酸序列较稳定,不同地区6个PCV2 毒株全基因组序列均由1 767 bp 组成,彼此间核苷酸序列相似性达95.3%～99.8%,亲缘关系密切;与GenBank 已发表的国内不同地区PCV2 参考毒株的相似性介于70.1%～99.1%;与欧洲各地区毒株的相似性介于67.7%～98.8%;其中与美国的毒株(AY094619)差异性最大,介于69.4%～70.8%之间.     

猪IFN-α在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

为了获得高效抗病毒活性的猪α-干扰素蛋白,采用PCR法扩增获得猪α-干扰素基因完整的开放阅读框(ORF),构建重组表达质粒pPICZαC-IFN,电击转化毕赤酵母感受态细胞X33.挑阳性菌落诱导表达,离心取上清,SDS-PAGE和 Western-blotting分析,可见1条相对分子质量约19 400的清晰蛋白条带,与理论值相符,表明表达产物为猪α-干扰素.在Vero细胞上检测该干扰素抗VSV的活性为4.04×10~6 IU/L.     

自噬与p62/SQSTM1在肝缺血再灌注中的作用

自噬是溶酶体依赖性的降解系统，p62 作为重要的蛋白载体，可促进受损蛋白经蛋白酶体和自噬体清除。p62 在线粒体自噬等选择性自噬中发挥重要作用。p62 与 Keap1 结合并通过自噬清除 Keap1，这导致游离的 Nrf2 水平增加，而 Nrf2 又可促进 p62 表达。因此自噬、p62、Nrf2 三者间存在密切的联系，相互调控。同时，Nrf2 还可促进谷胱甘肽 (Glutathione, GSH)和硫氧还蛋白(Thioredoxin, TXN)等多种分子的表达，而在肝缺血再灌注损伤过程中，肝细胞内这些分子可能参与细胞死亡的过程。因此，自噬与 p62 在肝缺血再灌注中的具体机制仍需进一步研究明确。     

工艺模型型面数据表达技术研究

本文结合工艺数模建模技术要求,针对公司研制和生产的航空钣金产品钣金件工艺模型型面数据表达的一般要求、表达方式,明确了钣金件工艺模型型面数据表达的目的和方式,规范了整体壁板、框肋零件、蒙皮零件及型材零件等工艺模型型面的数据表达,实现了在不同软件工具之间的集成.     

无接触式高温物体红外测量双色热图像成像方法研究及软件实现

用双色滤波光学成像系统可获取同一物体两种不同波长(λ1,λ2)的量子辐射强度的灰度成像,若波长λ1和λ2选择恰当,可利用普朗克的灰体辐射通量密度公式求出物体的不含平均黑度ελ(0＜ελ＜1)的辐射通量密度比R(T);利用R(T)可高精度地计算出高温物体温度,并能根据光谱给出物体细致的具有真实感的高温图像.文中最后给出了该系统处理高温物体实验的结果图.使用该方法研制出的非接触式热图像分析仪已商品化.     

基于Backstepping的严格反馈极值搜索系统控制器设计

针对一类含不确定参数的严格反馈型极值搜索系统的控制问题,将极值搜索方法和反演(Backstepping)控制方法相结合,设计出系统状态的极值参考轨迹,利用 Backstepping控制方法逐步递推选取适当的 Lyapunov函数设计控制器和不确定参数自适应估计律,实现目标函数的极值搜索。仿真表明所提出控制器设计方法的有效性。     

扰流片对汽油/空气脉冲爆震发动机爆震波压力的影响

在汽油 空气吸气式脉冲爆震发动机(PDE)协调工作的基础上,利用动态压力传感器测量了爆震波峰值压力。研究了圆环型扰流片的堵塞比、片数和间距对爆震波峰值压力的影响,以及上游扰流片间和下游扰流片间压力波峰值压力的变化。研究表明:一定结构的PDE,扰流片存在合理的堵塞比和间距以及最少片数。试验得到最佳堵塞比为44 5%左右,最佳片间距为爆震管内径的2倍左右,最少片数为6片。这些结果对PDE和扰流器的优化设计有重要指导意义。     

一种全长cDNA抑制缩减杂交方法及其水稻诱导表达基因分离的应用

以缩减杂交的原理和SMART cDNA合成方法为基础,开发了一种全长cDNA缩减杂交方法.该方法从微量的2个RNA样品合成全长cDNA,经PCR扩增和在两端连接不同的接头,通过2次缩减杂交获得含有高度浓缩的差异表达的全长或较大的基因片段,克隆后筛选出差异表达的基因.以噻菌灵(Probenazole,PBZ)为诱导剂处理水稻,获得了2个上调表达和1个下调表达基因的较长的cDNA片段.